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1分鐘解鎖兩代轉染試劑的差異

2021-8-27  閱讀(336)

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1分鐘解鎖兩代轉染試劑的差異



導讀


化學轉染方法是生物醫學研究中常用的轉染方法,主要包括兩類:陽離子脂質體和陽離子聚合物。在購買使用過程中,該如何選擇,他們之間的區別在哪,小翌來為大家進行簡要說明。


黃1.jpg



陽離子脂質體


陽離子脂質體介導的轉染是目前常用的轉染方式之一。其原理是陽離子脂質體的基本結構由帶正電荷的頭基和一個或兩個烴鏈組成,帶正電荷的頭基與帶負電荷的核酸通過靜電作用形成復合物,經細胞的內吞作用進入細胞。在DNA與陽離子脂質體形成lipoplex的過程中,陽離子脂質體起到復合和凝集DNA的作用,同時也有助于復合物與細胞膜的結合。

黃2.jpg 
圖1. 脂質體結構(源于Nature)

a.簡單的脂質體,由磷脂雙分子層構成的脂質囊泡

b.“隱身"脂質體,通過PEG修飾實現長循環

c.大多數陽離子脂質體具有洋蔥樣結構,DNA夾在陽離子膜之間

d.Kubitschke等人報道的新型脂質體,由花瓶狀的脂質分子(分子兩側有疏水鏈和親水鏈)組成雙分子層

陽離子脂質體應用非常廣泛,具有以下特點:
 使用方法簡單
 可攜帶大片段DNA,通用于各種類型的DNA或RNA
  能轉染各種類型的細胞
 沒有免疫原性
 在體外基因轉染中有很高的效率
近年來,體內轉染研究越來越火熱,陽離子脂質體在很大程度上由于以下特點限制了其進一步的應用,無法直接應用于體內研究:
 在血清存在的情況下會迅速失活
 脂質體本身會參與細胞生理活動,引起基因表達的上調或下調,造成細胞毒性
 在肺組織內累積,誘發強烈的抗炎反應,導致高水平的毒性

同時,人們也一直在尋找更有效、毒性小,同時對研究影響也小的轉染試劑。由于脂質類轉染試劑對細胞的毒性是由其脂質特性決定的,眾多的研究者和生物公司將新一代轉染試劑的開發聚焦在非脂質體的聚合物上。

黃3.jpg 
圖2. 陽離子脂質體與陽離子聚合物介導的轉染

陽離子聚合物


近年來國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉染技術,以其適用宿主范圍廣、操作簡便、對細胞毒性小、轉染效率高的特點,受到研究者們的青睞。其原理是帶正電的聚合物與帶負電的核酸磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞。
陽離子聚合物相對毒性較低,和陽離子脂質體最大的區別:

 不含疏水部分而*溶于水

 方便地進行化學修飾

 不像脂質體一樣破壞細胞結構

陽離子聚合物高效轉染的特征:

 濃縮DNA,將DNA運送到細胞內,并其在細胞核內釋放

 細胞毒性很低,很穩定

 不被血清清除

目前使用*泛的陽離子聚合物轉染試劑是聚乙烯亞胺(PEI),具有顯著的特點:

 毒性低、成本低、免疫原性低

 可將外源基因轉染到懸浮細胞或貼壁細胞中

黃4.jpg

圖3. PEI轉染DNA示意圖(源于網絡)

PEI是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"(proton sponge)體。自1995年PEI被用于DNA轉染以來,就因其安全性和穩定性而被廣泛應用于科學研究和基因療法中。

圖4. PEI使用效果圖 

 a. PEI 40000轉染GFP質粒到貼壁細胞Hek-293,72h后,轉染效率達到90%(左圖)

 b.PEI 40000轉染GFP質粒到懸浮細胞CHO-K1,72h后,轉染效率達到80%(右圖)

隨著PEI技術的不斷革新與發展,現在PEI被廣泛應用于生命科學研究、非病毒載體體內轉染研究、病毒和蛋白生產專用研究中。大量實驗證明,PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設計更復雜的基因載體時,PEI經常作為核心組成成分。

目前翌圣提供了多種轉染試劑,客戶可根據轉染核酸的種類/貼壁細胞/懸浮細胞等條件,選擇合適的轉染試劑,我們將在下期進行說明。



參考文獻

[1]. Andrzej W.Cwetsch, Bruno Pinto, Annalisa Savardi, Laura Cancedda. In vivo methods for acute modulation of gene expression in the central nervous system. Progress in Neurobiology. 2018 September 2018, Pages 69-85. doi.org/10.1016/j.pneurobio.2018.04.008



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產品名稱

產品編號

規格

Hieff TransTM脂質體核酸轉染試劑

40802ES02

0.5mL

40802ES03

1.0mL

Hieff TransTMsiRNA/miRNA體外轉染試劑

40806ES02

0.5mL

40806ES03

1.0mL

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