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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

ezbioscience EZB-exo2說明書

時(shí)間:2022-11-25閱讀:1141
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Exosome Isolation Kit (from cell culture media for NTA/TEM) 

產(chǎn)品概述

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介紹

EZBioscience®外泌體分離試劑盒(來自NTA/TEM細(xì)胞培養(yǎng)基)提供了一種簡單、可靠和快速的方法,用于從細(xì)胞培養(yǎng)基、尿液、支氣管肺泡灌洗液(BALF)、腦脊液(CSF)樣品中分離高質(zhì)量完整的總外泌體,而無需超速離心。


外泌體是含有RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡(30-120nm),由培養(yǎng)物中的各種類型的細(xì)胞分泌,并在體液(如血液,唾液,尿液和母乳)中大量存在。據(jù)報(bào)道,外泌體作為細(xì)胞間信使發(fā)揮作用,在特定細(xì)胞之間傳遞效應(yīng)物或信號大分子;然而,它們的形成、貨物的組成以及它們所涉及的生物學(xué)途徑尚不清楚。

外泌體分離試劑盒(來自細(xì)胞培養(yǎng)基)提供了一種簡單可靠的方法,可以從細(xì)胞培養(yǎng)基樣品中濃縮完整的外泌體。通過捆綁水分子,外泌體沉淀試劑迫使溶解性較低的組分(即外泌體)從溶液中取出,從而可以通過短暫且相對低速的離心收集它們。然后通過純化柱(0.22μm)純化重懸的外泌體。

之后,外泌體可用于RNA純化(用于RNA測序、RNA芯片、RT-qPCR)、蛋白質(zhì)提取、粒度檢測和電子顯微鏡等。

協(xié)議

一般準(zhǔn)則

a) 為確保分離的外泌體源自目標(biāo)細(xì)胞,請用外泌體耗盡胎牛血清(FBS)或無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,因?yàn)檎5腇BS含有ji高水平的外泌體,會(huì)污染細(xì)胞來源的外泌體。如果您無法獲得外泌體耗盡的FBS,某些細(xì)胞系可以在沒有FBS的培養(yǎng)基中生長長達(dá)12小時(shí)。

b) 不建議使用外泌體沉淀試劑 (EPR) 從其他種類的樣品中分離外泌體。如果要從血漿中分離完整的外泌體,請使用全外泌體分離(從血漿中分離)試劑。

準(zhǔn)備樣品

1.收獲5~20ml細(xì)胞培養(yǎng)基(或尿液,支氣管肺泡灌洗液,腦脊液)。

2.將血漿樣品在3000 × g 在4°C下離心10分鐘以除去細(xì)胞和碎片。

3.將含有無細(xì)胞培養(yǎng)基的上清液轉(zhuǎn)移到新管中,而不會(huì)干擾沉淀。

分離外泌體

1.將所需體積的無細(xì)胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新管中,并加入1/4體積的外泌體沉淀試劑(EPR)。

    文化媒體

    試劑

    5毫升

    1.25毫升

    20毫升

    5毫升





2.通過渦旋或倒置試管將培養(yǎng)基/試劑混合物充分混合,直到溶液均勻。將樣品在 2 ~ 8°C 下孵育過夜。

3.孵育后,將樣品在4°C下以10000×g離心30分鐘。

4.通過移液小心地吸出上清液并丟棄上清液。外泌體包含在管底部的沉淀中(在大多數(shù)情況下不可見)。

重懸外泌體

1.向沉淀中加入1× PBS或類似的緩沖液,上下渦旋或移液以重懸外泌體。

    啟動(dòng)文化媒體卷

    重懸體積

    1毫升

    30微升

    10毫升

    60微升

2.一旦沉淀重懸,外泌體就可以進(jìn)行下游分析或通過親和方法進(jìn)一步純化。

注意:純化的外泌體樣品可以在2~8°C下儲(chǔ)存長達(dá)7天,也可以儲(chǔ)存在-80°C以下長期儲(chǔ)存。為了最大限度地降低RNase污染的風(fēng)險(xiǎn),我們建議直接進(jìn)行進(jìn)一步的下游樣品處理。

產(chǎn)品詳情

名稱     Exosome Isolation Kit (from cell culture media for NTA/TEM)

編號       EZB-exo2

品牌       ezbioscience



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