inventbiotech Minute™ 動物細(xì)胞/組織總蛋白提取試劑盒

英文特生物技術(shù)（北京）有限公司成立于2016年，是美國英文特生物技術(shù)股份有限公司（Invent Biotechnologies, Inc.）在華子公司。作為應(yīng)用離心管柱濾器快速提取蛋白及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離的先驅(qū)，英文特公司成功研發(fā)出五十多個生命科學(xué)研究領(lǐng)域蛋白提取產(chǎn)品，其中具有多個特色產(chǎn)品，使原有的溶液法升級為柱式提取法，為蛋白提取分離帶來了新方案。全線產(chǎn)品均具有快捷，易用，產(chǎn)量高及重復(fù)性好的特性。在短短幾年中，產(chǎn)品以穩(wěn)定的品質(zhì)獲得了世界各國越來越多的科研機(jī)構(gòu)和科研者的青睞。英文特公司繼續(xù)致力于蛋白提取及純化，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離，蛋白組學(xué)以及蛋白間相互作用的產(chǎn)品開發(fā)及應(yīng)用，為生命科學(xué)領(lǐng)域的科研者提供便捷的研究方法和產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：Minute™ 動物細(xì)胞/組織總蛋白提取試劑盒 SD-001/SN-002

Minute™ Total Protein Extraction Kit for Animal Cultured Cells/Tissues

產(chǎn)品描述：

動物細(xì)胞/組織總蛋白提取試劑盒，由優(yōu)化細(xì)胞裂解液和0.6ml離心管柱組成，能夠迅速從動物細(xì)胞和組織(無脊椎動物和脊椎動物)中提取總蛋白，用于蛋白質(zhì)分析和進(jìn)一步純化。試劑盒同時提供天然和變性兩種不同的裂解液，可供用戶根據(jù)不同下游實(shí)驗(yàn)進(jìn)行選擇。離心管柱技術(shù)提取蛋白質(zhì)，樣品量最小可處理20ul，最大可達(dá)500ul。從細(xì)胞/組織中提取總蛋白質(zhì)僅需1-8分鐘，得率可達(dá)2-8mg/ml。

應(yīng)用：

可應(yīng)用于 SDS-PAGE, 免疫印跡, IP, ELISA，酶檢測及其他應(yīng)用。這個試劑盒提供了更快的總蛋白提取方法。

提取的的蛋白可以用于小型色譜純化柱純化蛋白的原料使用。

試劑盒組分

50 Preps: 4 Preps：

1. 25ml 變性細(xì)胞裂解液（SD-001） 1. 2.0ml 變性細(xì)胞裂解液（SD-001）

2. 25ml 天然細(xì)胞裂解液（SN-002） 2. 2.0ml 天然細(xì)胞裂解液（SN-002）

3. 50 個離心管柱 3. 4 個離心管柱

4. 50 個收集管 4. 4 個收集管

5. 2 根塑料研磨棒 5. 1 根塑料研磨棒

**注:試劑盒中的細(xì)胞裂解液不含任何還原劑和伯胺。

運(yùn)輸儲存：常溫運(yùn)輸，室溫保存。

重要產(chǎn)品信息

1. Minute TM總蛋白提取試劑盒是一款快速總蛋白提取試劑盒。蛋白酶抑制劑不是必須加入，但是如果下游

實(shí)驗(yàn)需要較長時間或者蛋白提取后需要保存較長時間，建議添加蛋白酶抑制劑。研究蛋白磷酸化，磷酸

酶抑制劑應(yīng)在使用前加入裂解液中。（各類抑制劑的添加方法請按照抑制劑母液比例，例如母液是

100X，添加時按照 1：100 添加，即 1ml 裂解液中添加 10ul 抑制劑）。推薦使用 BCA 試劑盒用于

蛋白濃度測定。

2. 裂解液的使用要根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)來選擇，變性裂解液（SD-001）適合用于 SDS-PAGE，WB 實(shí)驗(yàn)，天然裂

解液（SN-002）適合用于 ELISA，IP，CO-IP 等實(shí)驗(yàn)。

3. 使用SD-001變性裂解液提取的蛋白和使用SN-002天然裂解液提取的蛋白，做WB上樣前，仍需加Loading 

buffer 混勻煮沸樣品后上樣。

4. 如果變性裂解液在低溫情況下出現(xiàn)沉淀，在 37 度以上孵育至沉淀復(fù)溶可正常使用。

所需附加材料

1 X PBS

渦旋震蕩儀

臺式離心機(jī)

BCA 蛋白定量試劑盒

操作方法：

細(xì)胞樣品總蛋白提取

變性總蛋白提取（SD-001）SDS-PAGE，WB 實(shí)驗(yàn)適用

A．非貼壁細(xì)胞

1.將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成為套管放置于冰上預(yù)冷。

2.低速離心收集細(xì)胞，在離心管中加入預(yù)冷的 PBS，500Xg 離心 2-3 分鐘清洗細(xì)胞。棄去上清，剩余與細(xì)胞體

積相同體積的 PBS。渦旋震蕩重懸細(xì)胞。

3.加入表格 1 中相應(yīng)體積的細(xì)胞裂解液（SD-001），渦旋震蕩裂解細(xì)胞。（細(xì)胞數(shù)量和裂解液須保證對應(yīng)關(guān)系，

以達(dá)到最佳提取效率）

請注意：部分未wan全裂解的細(xì)胞不會影響樣品質(zhì)量。

4.將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。

5. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。

B．貼壁細(xì)胞

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成為套管放置于冰上預(yù)冷。

2. 貼壁細(xì)胞生長至 90-100%融合時，將預(yù)冷的 PBS 直接加入培養(yǎng)板，培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中清洗一次，wan全吸

出上清。

3.按照表 2 中將相應(yīng)體積的細(xì)胞裂解液（SD-001）均勻的加入整個器皿表面，用移液器反復(fù)吹打幾次以裂解

細(xì)胞，將細(xì)胞裂解物迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。（如提

取濃度不佳，可減少裂解液使用量）

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。

天然總蛋白提取（SN-002）ELISA，IP，CO-IP，酶活性檢測等實(shí)驗(yàn)適用

A．非貼壁細(xì)胞

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中成為套管，與天然細(xì)胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上預(yù)冷。

2. 低速離心收集細(xì)胞，在離心管中加入預(yù)冷的 PBS 清洗細(xì)胞一次，500Xg 離心 2-3 分鐘沉淀細(xì)胞。棄去上清，

在管中保留與細(xì)胞體積相同體積的 PBS。旋窩震蕩重懸細(xì)胞。

3. 加入表格 3 中相應(yīng)體積的細(xì)胞裂解液，渦旋震蕩裂解細(xì)胞 15 秒。將離心管放置于冰上 3-5 分鐘然后渦旋震

蕩 10 秒。（細(xì)胞數(shù)量和裂解液須保證對應(yīng)關(guān)系，以達(dá)到最佳提取效率）

4. 將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。

5. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。

B．貼壁細(xì)胞

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中成為套管，與天然細(xì)胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上預(yù)冷。

2. 貼壁細(xì)胞生長至 90-100%融合時，用預(yù)冷的 PBS 清洗細(xì)胞兩次，wan全吸出上清。

3. 按照表 4 中將相應(yīng)體積的細(xì)胞裂解液均勻的加入整個器皿表面，放置于冰上孵育 5 分鐘，用移液器反復(fù)吹

打以裂解細(xì)胞，將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管柱套管中，蓋上蓋子，14,000-16,000Xg 離心 30 秒取出。（如

提取濃度不佳，可減少裂解液使用量）

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。

動物組織總蛋白提取

變性總蛋白提取（SD-001）SDS-PAGE，WB 實(shí)驗(yàn)適用

以下步驟是從 15-20mg 動物組織中提取，對于不同的樣品起始量，需按比例調(diào)整裂解液的用量。

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成為套管放置于冰上預(yù)冷。

2. 將 15-20mg 新鮮/冷凍組織放置于離心管柱套管上，用塑料研磨棒向下按壓反復(fù)扭轉(zhuǎn)研磨 50-60 次，加入200ul 變性細(xì)胞裂解液（SD-001），繼續(xù)研磨 30-60 次。（組織用量不要過量，無需過度研磨，裂解液可分兩次

加入以得到最佳效果）注意：塑料研磨棒可以重復(fù)使用，用蒸餾水徹di沖洗干凈，用紙巾擦干。

3. 蓋上蓋子，室溫孵育 1-2 分鐘，14,000-16,000Xg 離心 1-2 分鐘。

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。

請注意：部分未wan全裂解的組織不會影響樣品質(zhì)量。

天然總蛋白提取（SN-002）ELISA，IP，CO-IP，酶活性檢測等實(shí)驗(yàn)適用

1. 將離心管柱（filter cartridges）套入接收管中成為套管，與天然細(xì)胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上預(yù)冷。

2. 將 15-20mg 新鮮/冷凍組織放置于離心管柱上，用塑料研磨棒向下按壓反復(fù)扭轉(zhuǎn)研磨 50-60 次，加入 200ul

天然細(xì)胞裂解液（SN-002），繼續(xù)研磨 30-60 次。（組織用量不要過量，無需過度研磨，裂解液可分兩次加入

以得到最佳效果）。注意：塑料研磨棒可以重復(fù)使用，用蒸餾水徹di沖洗干凈，用紙巾擦干。

3. 開蓋冰上孵育 5 分鐘，蓋上蓋子，4℃，14,000-16,000Xg 離心 1-2 分鐘。

4. 棄去離心管柱，收集管中即是蛋白樣品，可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)

常見問題