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NittoPhase®HL固相載體使用指南

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NittoPhase®HL固相載體使用指南

NittoPhase®HL Solid Support是一種優化設計的支持藥物級寡核苷酸高效合成的支持物。交聯聚苯乙烯樹脂具有高產率獲得高質量寡核苷酸所需的幾種*性能,超過了市場上可用的各種其他支持的性能。已證明該支持可在小規模和大規模合成以及各種合成儀(包括OligoProcess™)中有效執行。

 

層析柱填充建議

 

 

(a) 固定床柱

注意:為避免合成儀的潛在機械問題,使用NittoPhase®HL干粉填充合成柱,僅使用規定體積的推薦量。

 

1. 選擇具有所需裝載物的NittoPhase®HL Solid Support。

 

2. 數量  of  NittoPhase®HLSolid  支持  在6.3 mL色譜柱中有效合成所需的量見下表。*

 

3. 使用下表中推薦用于合成的載體量,用干燥載體填充不銹鋼色譜柱,連接色譜柱并啟動合成程序。

 

表1. NittoPhase®HL固相載體裝量建議。*

RNA合成

上樣量(µmol/g)

裝量(6.3 mL層析柱)

 

150

0.79 g

21聚體

200

0.74 g

 

250

0.69 g

 

DNA合成

上樣量(µmol/g)

裝量(6.3 mL層析柱)

 

300

0.83 g

20聚體

350

0.80 g

 

400

0.77 g

*對于其他尺寸的色譜柱,所需的裝量與上文所列體積相比呈線性變化。色譜柱填充體積可能因寡核苷酸的長度和修飾而異。

(b) 可調列

1. 確定合成的規模。

2. 根據支承載荷計算所需NittoPhase®HL固相支承的量:

支撐物用量[g]= 規模[µmol]÷支撐物上樣量[µmol/g]

3. 使用以下公式計算柱體積(CV):

CV[mL]= 支持量[g]÷0.109**

4. 使用以下公式計算柱高h:

h[cm]= 4 CV[mL]÷πd2 d為色譜柱直徑(cm)

5. 將支架轉移至色譜柱中,將活塞牢固調整至高度h。

6. 開始合成。

 

(c) 合成操作

1. 標準合成程序將適用于NittoPhase®HL Solid Support。

2. 合成完成后,使用標準去保護程序。用乙醇/水(1:1,v/v)沖洗載體以*回收。

3. 對于UnyLinker NittoPhase®HL,在55 ℃濃縮氫氧化銨中脫保護9-11小時足以進行UnyLinker裂解。

**基于250µmol/g的21聚體RNA。色譜柱填充量可能因寡核苷酸的長度和修飾而異。

 

NittoPhase®是Nitto Denko Corporation的商標。©2015 Kinovate Life Sciences Inc.版權所有。保留所有權利。本文提及的商標歸Kinovate Life Sciences Inc.或其各自所有者所有。在美國印刷。KLS F005 0415

 

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