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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司資料大小
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genebridges K006說(shuō)明書(shū)
用于快速敲除或修飾大腸桿菌染色體上的基因。
1.轉(zhuǎn)化用表達(dá)質(zhì)粒pRedET轉(zhuǎn)化將被修飾
的大腸桿菌菌株。
2. Red / ET重組
Red / ET表達(dá)是通過(guò)添加L-阿拉伯糖和溫度變化來(lái)誘導(dǎo)的。含有50 bp同源臂的FRT-PGK-gb2-neo-FRT盒被轉(zhuǎn)化。Red / ET介導(dǎo)的重組通過(guò)插入盒帶破壞了靶基因座。
3.可選:去除選擇標(biāo)記
Flp介導(dǎo)的切除,僅留下一個(gè)FRT部位。(另請(qǐng)參見(jiàn)我們的FRT選擇盒和Flp表達(dá)質(zhì)粒和菌株)。
Red / ET重組使堿基對(duì)可以準(zhǔn)確,特異性和忠實(shí)的方式交換遺傳信息。試劑盒隨附有FRT側(cè)翼的卡那霉素抗性標(biāo)記盒,可用于替換大腸桿菌染色體上的基因。Red / ET重組可替代大腸桿菌染色體上長(zhǎng)達(dá)30kb的片段。如果需要,使用FRT側(cè)翼抗性盒替代靶基因可以隨后通過(guò)FLP重組酶步驟去除選擇標(biāo)記。FLP表達(dá)質(zhì)粒可以從Gene Bridges購(gòu)買(mǎi)。通過(guò)重復(fù)插入試劑盒附帶的功能盒或與Gene Bridges提供的其他功能盒組合,可以產(chǎn)生多個(gè)基因敲除。重組過(guò)程由于pRedET表達(dá)質(zhì)粒的優(yōu)化設(shè)計(jì)而受到嚴(yán)格控制。重組蛋白的基因在誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的控制下,質(zhì)粒帶有溫度敏感的復(fù)制起點(diǎn),可在重組后方便地去除質(zhì)粒。
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