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552次swant 6B3說明書
產品:小鼠抗鈣視網膜蛋白抗體(單克隆)
代碼:6B3
批號:010399
形式:凍干濃縮上清液(不含防腐劑)。
數量:500µl。
復溶:用500µl雙蒸餾水。
用重組人calretinin-22k免疫小鼠產生抗calretinin的抗體6B3[1,2]。鈣視網膜蛋白22k是鈣視網膜蛋白基因的選擇性剪接產物(3),與鈣視網膜蛋白相同,可達Arg178。融合后以人重組鈣視網膜蛋白為靶標篩選雜交瘤細胞,篩選克隆6B3。抗體6B3識別鈣視網膜蛋白和鈣視網膜蛋白-22k共有的前4個EF手結構域內的表位(2)。評價其特異性和效價:a)通過生物素-抗生物素蛋白標記4%多聚甲醛(或10%福爾馬林緩沖液)固定的冷凍、振動和石蠟切片,b)通過免疫印跡的免疫酶標記,c)通過組織鈣視網膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(6)
該產品是針對鈣結合蛋白D-28k和鈣調蛋白相關的EF手家族鈣結合蛋白calretinin(4)的單克隆抗體。該抗體與不同種屬組織中的鈣視網膜蛋白發生特異性反應(見免疫印跡)。該抗體不與鈣結合蛋白D-28k或其他已知的鈣結合蛋白發生交叉反應,通過其在腦中的分布以及免疫印跡測定。Calretinin是一種有吸引力的神經解剖學工具,這種McAB保證了抗Calretinin抗體持續產生具有相同特異性和化學同一性的恒定滴度。該抗體可識別人間皮瘤中的鈣視網膜蛋白(4,5)。
復溶后,以小份(例如1µl)冷凍并保持在-80 ℃(或至少-20 ℃)。連續使用時,保持在4 ℃(含0.01%疊氮化納)。避免反復凍融。
腦提取物的免疫印跡
抗體6B3可特異性染色腦提取物免疫印跡上的鈣視網膜蛋白條帶(圖1)。
1 2 3 4 5 6 7
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圖1單克隆抗體6B3免疫印跡各種屬腦勻漿。 1:小鼠;2:大鼠;3:豚鼠;4:兔;5:食蟹猴;6:斑馬魚;7:雞。在所有種屬中,在29 kDa處檢測到條帶。 |
鈣視網膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學
抗體6B3免疫標記正常大腦中的神經元亞群,具有高效率(圖2a),但不染色鈣視網膜蛋白基因敲除小鼠的大腦(圖2b)。
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圖2a:對照小鼠大腦皮層McAB 6B3的免疫組織化學染色。注意上層散在中間神經元的強染色(箭頭)。×100 | 圖2b:在calretini基因敲除小鼠的大腦皮層中不存在McAB 6B3的特異性免疫組織化學染色(5)。抗小鼠二抗引起的血管壁非特異性染色(星號)。×100 |
免疫組織化學:當在冷凍切片機或多聚甲醛(4%)或福爾馬林固定組織的石蠟切片上進行時,為1:2'000-1:5'000。
免疫印跡:1:1'000-1:2'000。
對于免疫組織化學和免疫印跡,采用抗生物素蛋白-生物素法測定滴度。我們建議通過滴定實驗確定宜稀釋度
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