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上海起發(fā)實驗試劑有限公司資料大小
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607次biochain epoc培養(yǎng)說明
一、MEPOC生長培養(yǎng)基的制備
我們推薦使用Biochain的MEPOC生長培養(yǎng)基(CAT Z7030033)培養(yǎng)我們的MEPC。
一。在室溫水浴中解凍MEPOC生長介質(zhì)補充劑(CAT Z7030034)。
2.在Mepoc基本培養(yǎng)基(CAT Z7030035)的瓶子(500 ml)中加入整個體積(25 ml)的EPOC生長培養(yǎng)基補充劑,制備Mepoc生長培養(yǎng)基。生物鏈的mepoc生長培養(yǎng)基不含抗生素,但如果擔心污染,可以在培養(yǎng)基中添加抗生素。
三。使用前,在37°C水浴中加熱部分mepoc生長介質(zhì)。
二。解凍冷凍細胞
一。在37°C水浴中加熱EPOC生長培養(yǎng)基。
2.用70%乙醇擦拭冰凍小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解凍冷凍細胞。
三。將細胞懸液無菌轉(zhuǎn)移到15ml試管中。用1毫升生長培養(yǎng)基沖洗小瓶,并在15毫升試管中與細胞混合。以170克(或1400轉(zhuǎn)/分)的速度離心5分鐘,使細胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鮮小鼠epc培養(yǎng)基,置于t25燒瓶中。
四。在37℃下,用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)物顯示紡錘體形態(tài),培養(yǎng)2-3天后細胞數(shù)量應加倍。
三、亞培養(yǎng)細胞
一。當細胞達到100%匯合時進行繼代培養(yǎng)。
2.在通過細胞前一天更換培養(yǎng)基。
三。在37°C水浴中加熱Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生長培養(yǎng)基。
四。用Dulbecco的PBS沖洗細胞。
5個。用胰蛋白酶/EDTA溶液(1.5毫升/25平方厘米)培養(yǎng)細胞3-5分鐘,直到大約90%的細胞開始分離。輕輕地填充血管使細胞分離。
6.加入相當于胰蛋白酶/EDTA體積1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶,輕輕搖動培養(yǎng)管混合。
7號。輕輕地重新懸浮細胞,并將細胞轉(zhuǎn)移到15ml錐形管中。
8個。在室溫下將細胞懸液在170 x g下離心5分鐘。
9號。小心地去除上清液,不要干擾細胞顆粒。在生長培養(yǎng)基中重新懸浮細胞。
10個。將它們按1:5的比例放入新的培養(yǎng)皿中。
11號。在37℃下,用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。每隔一天換一次。
iv.在充滿mepoc生長培養(yǎng)基的t25、t75、t125和t225燒瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。
當燒瓶到達時:
一。從燒瓶中倒出大部分培養(yǎng)基,并在燒瓶中留適量。
2.在37℃下,用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。第二天換成中號,以后每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)基在培養(yǎng)2-3天后,紡錘形細胞形態(tài)和細胞數(shù)量應加倍。
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