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上海起發(fā)genelink 26-4000-10說明書
Random Primers 5’ Phosphorylated
規(guī)格:50微克
運輸條件:常溫
隨機引物5'磷酸化描述
隨機引物是代表該大小的所有可能序列的寡核苷酸的混合物。與使用六聚體(1,2)和cDNA合成類似,隨機引物可用于在低聚物標記中引發(fā)合成。隨機引物標記產(chǎn)生高比活性標記DNA探針,可用于所有南方、北方和原位雜交研究。隨機的
引物也可以類似于在cDNA合成中使用六聚體與寡聚體d(T)組合來產(chǎn)生更多的5'端cDNA
序列
最近,隨機引物被用來檢測DNA多態(tài)性。這些多態(tài)性,簡單地被檢測為DNA的片段,從父母一方擴增而不是從另一方擴增,以孟德爾的方式遺傳,可用于構(gòu)建多種物種的遺傳圖譜。作者建議,這些多態(tài)性被稱為RAPD(發(fā)音快速)標記,在隨機擴增多態(tài)性DNA之后(3)。
重建
建議在無核糖核酸酶的DEPC處理水中以50µM的濃度進行重組。
-短時間旋轉(zhuǎn)試管,將運輸過程中可能卡在瓶蓋中的試管內(nèi)容物卸下。顆粒可能非常小,不可見。
推薦用法
在20µl反應(yīng)體積中,使用4µl 50µM溶液中的1µg DNA或RNA作為模板。
詳見反應(yīng)條件。
質(zhì)量控制數(shù)據(jù)
使用逆轉(zhuǎn)錄酶和poly(A)+RNA作為模板,該產(chǎn)品被證明能夠引發(fā)第一鏈cDNA反應(yīng),并且
使用klenow DNA聚合酶在隨機引物標記反應(yīng)中進行探針標記。
功能分析條件
下面給出的條件已經(jīng)過測試,以產(chǎn)生第一鏈cDNA合成,并給出了一個例子。使用該產(chǎn)品的其他實驗室已經(jīng)使用了各種變體和其他方案,以產(chǎn)生出色的第一鏈合成。研究人員可以替代他們自己的反應(yīng)條件。
RNA的質(zhì)量對逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)非常重要。必須有完整的全長RNA作為模板材料,不含微量RNA酶和污染性化學物質(zhì)。低質(zhì)量的RNA模板通常是導致cDNA產(chǎn)物截短和不完整的原因。
按照下面給出的順序添加組件。反應(yīng)體積可以放大。