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上海起發實驗試劑有限公司
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上海起發實驗試劑有限公司 |  資料大小 |
1.9MB |
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 資料類型 |
PDF 文件 |  資料圖片 |
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neb P0704L說明書
PNGase F.
目錄 ＃
P0704S
濃度
500,000單位/毫升尺寸
P0704L 75,000個單位
價格表
$ 718.00
PNGase F是從糖蛋白中去除幾乎所有N-連接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，雜合和復合寡糖的內部GlcNAc和天冬酰胺殘基之間切割。
- 通過SDS-PAGE和完整的ESI-MS測定，純度≥95％
- 非重組，沒有可檢測的內切糖苷酶F1，F2或F3污染
- 儲存在50％甘油中; 宜活動和穩定性長達24個月
- 可在天然或變性條件下使用
- 優化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，適合進一步分析
肽 - N-糖苷酶F，也稱為PNGase F，是一種酰胺酶，可裂解來自N-連接糖蛋白的高甘露糖，雜合寡糖和復合寡糖的內層GlcNAc和天冬酰胺殘基（1）
詳細的特異性： 
當內部的GlcNAc殘基與α1-3巖藻糖殘基連接時，PNGase F不能從糖蛋白切割N-連接的聚糖。這種修飾常見于植物和一些昆蟲糖蛋白中。
產品來源
PNGase F從腦膜炎黃桿菌（Flavobacterium meningosepticum）（3）中純化，不含蛋白酶和Endo F活性。
提供的試劑
本產品隨附以下試劑：
| 存儲在（°C） | 濃度 | |
| 糖蛋白變性緩沖液 | -20 | 10 X. |
| NP-40 | -20 | 10％ |
| GlycoBuffer 2 | -20 | 10 X. |
應用功能
- 糖蛋白分析
- 從糖蛋白中去除高甘露糖，雜合和復雜的 N-聚糖
- 無污染物（Endo F，蛋白酶等）
單位定義
一個單位定義為在37℃下在10μl的總反應體積中在1小時內從10μg變性的RNase B中除去> 95％的碳水化合物所需的酶量。
單位定義測定：
將10μgRNaseB用1X糖蛋白變性緩沖液（0.5％SDS，40mM DTT）在100℃變性10分鐘。加入NP-40和GlycoBuffer 2后，加入兩倍稀釋的PNGase F，將反應混合物在37℃下溫育1小時。通過SDS-PAGE顯現反應產物的分離。
1X糖蛋白變性緩沖液
0.5％SDS
40 mM DTT
1X NP-40
1％NP-40，MilliQ-H 2 O
反應條件
1X GlycoBuffer 2
在37°C孵育
1X GlycoBuffer 2
50 mM磷酸鈉
（pH值@ 25°C）
貯存溫度
-20℃下
儲藏條件
在 25℃下，20mM Tris-HCl
50mM NaCl
5mM EDTA
50％甘油
pH 7.5
熱滅活
75°C，10分鐘
分子量
表觀：36000道爾頓
- 由于SDS抑制PNGase F活性，因此必須使NP-40存在于反應混合物中。為什么這種非離子型去污劑抵消SDS抑制作用目前尚不清楚。
- 為了使天然糖蛋白去糖基化，可能需要更長的孵育時間以及更多的酶。
- PNGase F不會切割 含有核心α1-3巖藻糖的N-連接聚糖。
- 典型反應條件：請參閱協議
