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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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neb P0704L說(shuō)明書(shū)
PNGase F.
目錄 ＃
P0704S
濃度
500,000單位/毫升尺寸
P0704L 75,000個(gè)單位
價(jià)格表
$ 718.00
PNGase F是從糖蛋白中去除幾乎所有N-連接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，雜合和復(fù)合寡糖的內(nèi)部GlcNAc和天冬酰胺殘基之間切割。
- 通過(guò)SDS-PAGE和完整的ESI-MS測(cè)定，純度≥95％
- 非重組，沒(méi)有可檢測(cè)的內(nèi)切糖苷酶F1，F(xiàn)2或F3污染
- 儲(chǔ)存在50％甘油中; 宜活動(dòng)和穩(wěn)定性長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月
- 可在天然或變性條件下使用
- 優(yōu)化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，適合進(jìn)一步分析
肽 - N-糖苷酶F，也稱為PNGase F，是一種酰胺酶，可裂解來(lái)自N-連接糖蛋白的高甘露糖，雜合寡糖和復(fù)合寡糖的內(nèi)層GlcNAc和天冬酰胺殘基（1）
詳細(xì)的特異性： 
當(dāng)內(nèi)部的GlcNAc殘基與α1-3巖藻糖殘基連接時(shí)，PNGase F不能從糖蛋白切割N-連接的聚糖。這種修飾常見(jiàn)于植物和一些昆蟲(chóng)糖蛋白中。
產(chǎn)品來(lái)源
PNGase F從腦膜炎黃桿菌（Flavobacterium meningosepticum）（3）中純化，不含蛋白酶和Endo F活性。
提供的試劑
本產(chǎn)品隨附以下試劑：
| 存儲(chǔ)在（°C） | 濃度 | |
| 糖蛋白變性緩沖液 | -20 | 10 X. |
| NP-40 | -20 | 10％ |
| GlycoBuffer 2 | -20 | 10 X. |
應(yīng)用功能
- 糖蛋白分析
- 從糖蛋白中去除高甘露糖，雜合和復(fù)雜的 N-聚糖
- 無(wú)污染物（Endo F，蛋白酶等）
單位定義
一個(gè)單位定義為在37℃下在10μl的總反應(yīng)體積中在1小時(shí)內(nèi)從10μg變性的RNase B中除去> 95％的碳水化合物所需的酶量。
單位定義測(cè)定：
將10μgRNaseB用1X糖蛋白變性緩沖液（0.5％SDS，40mM DTT）在100℃變性10分鐘。加入NP-40和GlycoBuffer 2后，加入兩倍稀釋的PNGase F，將反應(yīng)混合物在37℃下溫育1小時(shí)。通過(guò)SDS-PAGE顯現(xiàn)反應(yīng)產(chǎn)物的分離。
1X糖蛋白變性緩沖液
0.5％SDS
40 mM DTT
1X NP-40
1％NP-40，MilliQ-H 2 O
反應(yīng)條件
1X GlycoBuffer 2
在37°C孵育
1X GlycoBuffer 2
50 mM磷酸鈉
（pH值@ 25°C）
貯存溫度
-20℃下
儲(chǔ)藏條件
在 25℃下，20mM Tris-HCl
50mM NaCl
5mM EDTA
50％甘油
pH 7.5
熱滅活
75°C，10分鐘
分子量
表觀：36000道爾頓
- 由于SDS抑制PNGase F活性，因此必須使NP-40存在于反應(yīng)混合物中。為什么這種非離子型去污劑抵消SDS抑制作用目前尚不清楚。
- 為了使天然糖蛋白去糖基化，可能需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間以及更多的酶。
- PNGase F不會(huì)切割 含有核心α1-3巖藻糖的N-連接聚糖。
- 典型反應(yīng)條件：請(qǐng)參閱協(xié)議
