HTI 凝血因子X(jué)a

haemtech Coagulation Factor Xa

因子Xa在凝血酶原
酶中的參與說(shuō)明了絲氨酸蛋白酶因子Xa在凝血酶原酶復(fù)合物中的參與。膜結(jié)合因子X(jué)a與膜結(jié)合因子Va結(jié)合以形成凝血酶原酶復(fù)合物。該復(fù)合物通過(guò)蛋白水解除去凝血酶原的片段1.2（F1.2）部分，有效地將酶原凝血酶原（II）轉(zhuǎn)化為活性絲氨酸蛋白酶凝血酶（IIa）。

HCXA-0060

HCBXA-0061 

HCXA-GD Human gla-Domainless Factor Xa

HCXA-EGR

HCXA-DEGR 

HCXA-BEGR

BCXA-1060

BCXA-EGR 

 BCXA-DEGR

MCXA-5060 鼠標(biāo)因子X(jué)a

通過(guò)內(nèi)在或外在因子Xase復(fù)合物激活酶原因子X(jué)產(chǎn)生活性絲氨酸蛋白酶因子X(jué)a（1,2）。因子X(jué)的活化需要重鏈的蛋白水解切割，導(dǎo)致活化糖肽的釋放。因子X(jué)a中的重鏈區(qū)含有絲氨酸蛋白酶催化結(jié)構(gòu)域，而如酶原中的輕鏈含有膜結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

因子Xa參與凝血酶原酶復(fù)合物，其催化凝血酶原快速轉(zhuǎn)化為凝血酶。凝血酶原酶是由在血漿存在下組裝在細(xì)胞表面上的因子X(jué)a（酶）和因子Va（輔因子）組成的酶復(fù)合物。盡管因子X(jué)a可以獨(dú)立地催化凝血酶原的活化，但是在*組裝凝血酶原酶復(fù)合物的情況下，該反應(yīng)發(fā)生的速率增加了近300,000倍。在解體凝血酶原酶復(fù)合物后，通過(guò)輔因子的失活，因子Va或通過(guò)抑制劑如ATIII直接抑制因子X(jué)a來(lái)終止因子X(jué)a在體內(nèi)的凝固活性。

近年來(lái)，分子生物學(xué)家利用因子Xa對(duì)細(xì)菌中表達(dá)的融合蛋白進(jìn)行位點(diǎn)特異性切割（9-12）。將Xa因子敏感位點(diǎn)摻入目標(biāo)重組蛋白和促進(jìn)純化和/或表達(dá)的肽或蛋白質(zhì)之間。通過(guò)用因子X(jué)a切割，從表達(dá)的雜交種中釋放靶蛋白。然后可以通過(guò)親和層析容易地除去因子X(jué)a。

因子Xa通過(guò)用從羅素的毒蛇毒液中分離的因子X(jué)活化劑活化純化的因子X(jué)來(lái)制備。通過(guò)在苯甲脒 - 瓊脂糖上的色譜法從活化混合物中純化因子X(jué)a，然后進(jìn)行凝膠過(guò)濾（1,3）。還可獲得幾種因子X(jué)a的修飾形式，包括：A）含有三肽氯甲基酮抑制劑EGRck或熒光抑制劑Dansyl-EGRck的活性位點(diǎn)阻斷因子X(jué)a; 和B）人Gla-domainlessβ-因子X(jué)a。該酶以50％（體積/體積）甘油/ H2O供應(yīng)，應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃。通過(guò)SDS-PAGE分析測(cè)定純度，并在因子X(jué)a凝固測(cè)定和/或顯色底物測(cè)定中測(cè)量活性。

除了其在凝血研究中的廣泛應(yīng)用之外，因子Xa還可用于融合蛋白的位點(diǎn)特異性切割。將因子X(jué)a敏感位點(diǎn)摻入目的重組蛋白和促進(jìn)純化和/或表達(dá)的肽或蛋白質(zhì)之間。通過(guò)用因子X(jué)a切割，從表達(dá)的雜交種中釋放靶蛋白。然后可以通過(guò)親和層析容易地除去因子X(jué)a。批次一致性確保每次都可重現(xiàn)的結(jié)果。對(duì)于涉及細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)與我們聯(lián)系，討論用于細(xì)胞培養(yǎng)的定制低內(nèi)毒素批次。

參考

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