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上海起發實驗試劑有限公司
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高保真?高效率?高速PCR酶
KOD -Plus- Neo
用途
PCR
說明
KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶KOD -Plus-系列技術的基礎上，應用了本公司新開發的「延伸增強劑」，保持了KOD -Plus-系列高保真性（約為Taq的80倍）的同時，通過抑制<停滯現象>，明顯提高了對微量模板DNA、長目的片段的擴增效率。 |
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特征
●可對微量模板DNA進行高保真?高效率的擴增
通過應用延伸增強劑技術，即便是微量模板DNA也可對目的基因進行高保真?高效率的擴增。同時本酶具備高保真性（約為Taq的80倍），可準確地對低拷貝數模板的目的基因進行擴增。
※PCR錯配率是通過使用各種酶以人基因組DNA為模板擴增β-globin基因(2.4kb)，對PCR產物進行TA克隆后，對96個克隆進行測序分析，測得的結果。
●縮短了延伸時間<30sec./kb>（長目的片段更方便）
延伸時間從原產品的60sec./kb縮短到30sec./kb。對長目的片段的擴增更加方便。
●實現了各種引物同一循環條件
20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先嘗試2步法。循環條件無需探討非常簡便。（請參考基本反應條件）
*Tm值采用最鄰近法(Nearest Neighbor method)計算得到的值。
●長目的片段的擴增
提高了延伸性，可對各種長度的目的片段進行擴增。已通過實驗確認可對24kb的基因組DNA進行擴增。
●采用熱啟動法，提高了PCR性能
原理
KOD DNA polymerase具有強有力的3’→5’核酸外切酶活性（校正活性），可準確地對目的片段進行擴增，作為克隆用PCR酶獲得了廣泛的好評。 然而，高保真性PCR酶在20?30循環以后，容易出現擴增無法持續的<停滯現象>。
| KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶：KOD -Plus-系列技術的基礎上，應用了本公司新開發的「延伸增強劑」，保持了KOD -Plus-系列高保真性（約為Taq的80倍）的同時，通過抑制<停滯現象>，明顯提高了對微量模板DNA、長目的片段的擴增效率。 |
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實驗例
1. Total RNA的各種基因全長ORF的擴增
以HeLa細胞來源的Total RNA逆轉錄后得到的cDNA（Total RNA 50 ng相當）為模板， 對各種蛋白激酶的ORF（open reading frame）的全長擴增。反應根據各PCR酶的推薦條件進行了30個循環。結果可見，只有用KOD -Plus- Neo的情況下，所有的基因都能得到明亮的擴增產物，所有的ORF都能迅速地進行克隆。
2. β-globin基因上各種長度區域的擴增效率?延伸性的比較
以人基因組DNA（50ng）為模板，對各種長度的β -globin 基因進行擴增。反應按各PCR 酶的推薦條件，進行了30個循環。結果顯示，只有用KOD -Plus- Neo 的情況下，17.5 kb 的片段能確認得到明亮的條帶。 而且，17.5 kb 以下的片段，用KOD -Plus- Neo 的得率要高得多。
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參考文獻
1) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63 : 4504-4510 (1997)
2) H. Hashimoto et al., J. Biochem.(Tokyo), 125 : 983-986 (1999)
3) H. Mizuguchi et al., J. Biochem.(Tokyo), 126 : 762-768 (1999)
4) M. Nishioka et al., J. Biotechnol., 88 : 141-149 (2001)
5) H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol., 306 : 469-77 (2001)
6) T. Imanaka et al., J. Chin. Inst.Chem. Engrs., 32 : 277-288 (2001)
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