蛋白質(zhì)定量分析方法：iTRAQ、SILAC、Label-Free與AQUA的比較檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在現(xiàn)代生命科學(xué)研究中，dànbáizhì定量分析是揭示生物過程機(jī)制、疾病標(biāo)志物篩選、藥物作用機(jī)制解析等研究的重要手段。相較于dànbáizhì表達(dá)檢測(cè)方法，定量蛋白組學(xué)（Quantitative Proteomics）具備高通量、靈敏度高、可實(shí)現(xiàn)多樣本對(duì)比等優(yōu)勢(shì)。當(dāng)前主流的dànbáizhì定量技術(shù)主要分為四類：iTRAQ、SILAC、Label-Free與AQUA。每種方法各有特點(diǎn)，適用于不同的研究場(chǎng)景和樣本類型。本文將系統(tǒng)對(duì)比這些技術(shù)原理、優(yōu)勢(shì)與局限，為科研人員選擇合適策略提供參考。

一、iTRAQ：基于標(biāo)記的高通量定量策略

??技術(shù)原理

iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）是一種同位素標(biāo)簽技術(shù)，通過將穩(wěn)定同位素標(biāo)記的試劑與肽段上的氨基結(jié)合，實(shí)現(xiàn)樣本間的定量比較。每種iTRAQ標(biāo)簽在質(zhì)譜一級(jí)（MS1）顯示相同質(zhì)量，在MS2中通過釋放出特征報(bào)告離子實(shí)現(xiàn)多重樣本定量。

??優(yōu)勢(shì)

• 可實(shí)現(xiàn)多達(dá)8或16個(gè)樣本的同時(shí)定量（取決于iTRAQ試劑套裝）

• 數(shù)據(jù)重現(xiàn)性好，適合大規(guī)模樣本研究

• 適用于復(fù)雜生物樣本，如組織、體液

??局限性

• 標(biāo)記成本高，實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜

• 存在比值壓縮（ratio compression）問題，可能影響定量精度

• 需要高分辨率質(zhì)譜儀器支持，如Orbitrap或Q-TOF

??應(yīng)用場(chǎng)景

適合需要高通量并行對(duì)比的研究，如疾病組學(xué)研究、藥效學(xué)分析等。

二、SILAC：細(xì)胞水平的同位素標(biāo)記技術(shù)

??技術(shù)原理

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）通過在細(xì)胞培養(yǎng)過程中引入含重氮或重碳的“輕/重”氨基酸，使蛋白在表達(dá)階段即完成標(biāo)簽標(biāo)記。標(biāo)記后的樣本可直接進(jìn)行LC-MS/MS分析，對(duì)比不同處理?xiàng)l件下的表達(dá)差異。

??優(yōu)勢(shì)

• 標(biāo)記效率高，避免樣本間變異

• 貼近生理?xiàng)l件，無需化學(xué)標(biāo)記

• 數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性好，適合動(dòng)態(tài)研究

??局限性

• 僅適用于可培養(yǎng)細(xì)胞體系

• 成本較高，對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求高

• 樣本通量有限，zuì多三種標(biāo)記（輕、中、重）

??應(yīng)用場(chǎng)景

適合研究細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路、藥物干預(yù)機(jī)制等機(jī)制研究型課題。

三、Label-Free：不依賴標(biāo)簽的簡(jiǎn)便策略

??技術(shù)原理

Label-Free Quantification（LFQ）依賴于肽段的離子強(qiáng)度（peak intensity）或譜圖數(shù)（spectral count），通過對(duì)樣本中每個(gè)蛋白的信號(hào)進(jìn)行相對(duì)定量，適用于無xiànliàng樣本。

??優(yōu)勢(shì)

• 成本低、操作簡(jiǎn)便，無需額外標(biāo)記試劑

• 樣本通量無限，適合探索性研究

• 可適配多種質(zhì)譜平臺(tái)

??局限性

• 對(duì)質(zhì)譜平臺(tái)的穩(wěn)定性要求高

• 定量精度相對(duì)標(biāo)簽法略低

• 數(shù)據(jù)分析復(fù)雜度高，需zhuānyè算法支持

??應(yīng)用場(chǎng)景

Label-Free特別適合早期探索性研究、樣本量較大的臨床樣本篩選等。

四、AQUA：juéduì定量的黃金標(biāo)準(zhǔn)

??技術(shù)原理

AQUA（Absolute QUAntification）采用已知濃度的穩(wěn)定同位素合成肽作為內(nèi)標(biāo)，加入待測(cè)樣本中進(jìn)行LC-MS/MS分析，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出目標(biāo)蛋白的juéduì含量。

??優(yōu)勢(shì)

• 可實(shí)現(xiàn)jīngquè的juéduì定量

• 高特異性，適合驗(yàn)證階段

• 適用于低豐度蛋白或生物標(biāo)志物的檢測(cè)

??局限性

• 需定制同位素肽段，成本高

• 目標(biāo)蛋白數(shù)目受限

• 不適合高通量篩選

??應(yīng)用場(chǎng)景

AQUA常用于生物標(biāo)志物驗(yàn)證、臨床檢測(cè)方法開發(fā)。

五、技術(shù)對(duì)比總結(jié)

百泰派克生物科技致力于提供高質(zhì)量的定量蛋白組分析服務(wù)，依托先進(jìn)的質(zhì)譜平臺(tái)與經(jīng)驗(yàn)豐富的分析團(tuán)隊(duì)，我們可為客戶量身定制zuì優(yōu)實(shí)驗(yàn)流程，并提供高質(zhì)量的數(shù)據(jù)挖掘與結(jié)果解讀。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

蛋白質(zhì)定量分析方法：iTRAQ、SILAC、Label-Free與AQUA的比較檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹